TUNEL-Methode
Die TUNEL-Methode (TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling) dient der Darstellung von Zellkernen apoptotischer Zellen. „TdT“ steht für „terminal desoxynucleotidyl transferase“, ein Enzym, das in einem Zwischenschritt der Technik verwendet wird.
Methode[Bearbeiten | Quelltext bearbeiten]
Während der Apoptose wird der Desoxyribonukleinsäure-Strang (DNA-Strang) des Zellkerns durch die Aktivität von Endonukleasen fragmentiert. Die an den Bruchenden freiwerdenden Hydroxygruppen (3'-OH-Gruppen) werden durch das Enzym TdT mit markierten Nukleotiden versehen, welche z. B. aufgrund von Fluoreszenz mit entsprechenden Mikroskopen sichtbar gemacht werden können.
Die Methode wurde 1992 erstmals beschrieben.[1] An der Methode wurde in den darauffolgenden Jahren Kritik geübt, da eine Unterscheidung zwischen nekrotischen und apoptotischen Zelluntergängen nur bedingt möglich war.[2] In den Jahren darauf wurde beschrieben, wie die Technik hinsichtlich auftretender Probleme modifiziert und verbessert werden kann.[3][4][5]
Weblinks[Bearbeiten | Quelltext bearbeiten]
- Jennifer Jewell, Andrea M. Mastro: Using terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) enzyme to detect TUNEL-positive, GFP-expressing apoptotic cells. (pdf; 62 kB). In: Cell Notes. 3, 2002, S. 13–14.
Einzelnachweise[Bearbeiten | Quelltext bearbeiten]
- ↑ Y. Gavrieli u. a.: Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation. In: J Cell Biol. 119, 1992, S. 493–501. PMID 1400587.
- ↑ B. Grasl-Kraupp u. a.: In situ detection of fragmented DNA (TUNEL assay) fails to discriminate among apoptosis, necrosis, and autolytic cell death: a cautionary note. In: Hepatology. 21(5), Mai 1995, S. 1465–1468. PMID 7737654.
- ↑ A. Negoescu u. a.: Importance of DNA fragmentation in apoptosis with regard to TUNEL specificity. In: Biomed Pharmacother. 52(6), 1998, S. 252–258. PMID 9755824.
- ↑ F. Labat-Moleur u. a.: TUNEL apoptotic cell detection in tissue sections: critical evaluation and improvement. In: J. Histochem. Cytochem. 46(3), Mar 1998, S. 327–334. PMID 9487114.
- ↑ A. Negoescu u. a.: In situ apoptotic cell labeling by the TUNEL method: improvement and evaluation on cell preparations. In: J. Histochem. Cytochem. 44(9), Sep 1996, S. 959–968. PMID 8773561.