„CAG-Promotor“ – Versionsunterschied
Wichtiges Tool in der Molekularbiologie.Artikel nach Vorbildern"tac-Promoter"cund der engl. Seite angelegt |
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Version vom 3. März 2018, 19:28 Uhr
Der CAG-Promotor ist ein synthetisch erzeugtes DNA-Fragment, das in der Molekularbiologie, Biochemie, und Biotechnologie als Werkzeug bei der Proteinexpression eingesetzt wird. Das DNA-Konstrukt dient dem Erreichen eines hohen Genexpressionslevels in eukaryotischen Zellen und somit zur Überexpression rekombinanter Proteine. Der CAG-Pomotor wurde im Labor von Jun-ichi Miyazaki konstruiert.[1] Er besteht aus (C), dem Cytomegalovirus (CMV) early Enhancerelement, (A), dem Promotor, dem ersten nicht tranlatierten Exon und dem 5'-Teil des ersten Introns des Hühnchen beta-Aktin Gens, (G), dem 3'-Teil des zweiten Introns und dem 5'-Teil des dritten Exons des Kaninchen beta-Globin Gens.
Der CMV-Enhancer ist Bestandteil vieler eukaryotischer Expressionplasmide. Das Intron des Aktin-Gens weißt ebenfalls eine Enhanceraktivität auf. Zudem erhöhen Introns in eukaryotischen Vektoren die Genexpression.[2] Der Abschnitt aus dem beta-Globin Gen enthält eine für das Spleißen wichtige branch point sequence und ein Spliceakzeptorsequenz (3'-splice site). Auch wenn das das synthetische Element als CAG-Promotor bezeichnet wird ist es im strengen Sinn ein 5'-aktivierende Element, da es neben dem Promotor, den CMV-Enhancer, Intron- und Exon-Sequenzen enthält.
Ein oft verwendeter Vektor, pCAGGS, der den CAG-Promoor enthält, wurde auf der Basis eines pUC-Vektors konstruiert.[3] Er enthält zusätzlich das Polyadenalierungssignal des beta-Globin Gens.
Die Verwendung des CAG-Promotors erlaubt auch eine hohe Expression in transgenen Tieren. So konnte in einer transgenen Mauslinie GFP mit Ausnahme der Erythrozyten und der Haare in allen Geweben nachgewiesen werden.[4] Beim Einsatz in embryonalen Stammzellen hat der CAG-Promotor den Vorteil, dass es nicht zum Abschalten (Gen-silencing) seiner Expression kommt.[5]
Weblinks
- [1]pCAGGS Vektor-Information bei Addgene
Literatur
- ↑ Miyazaki Jun-ichi, Takaki Satoshi, Araki Kimi, Tashiro Fumi, Tominaga Akira, Takatsu Kiyoshi, Yamamura Ken-ichi: Expression vector system based on the chicken β-actin promoter directs efficient production of interleukin-5. In: Gene. 79, 1989, S. 269, doi:10.1016/0378-1119(89)90209-6.
- ↑ A. R. Buchman, P. Berg: Comparison of intron-dependent and intron-independent gene expression. In: Molecular and cellular biology. Band 8, Nummer 10, Oktober 1988, S. 4395–4405, PMID 3185553, PMC 365513 (freier Volltext).
- ↑ H. Niwa, K. Yamamura, J. Miyazaki: Efficient selection for high-expression transfectants with a novel eukaryotic vector. In: Gene. Band 108, Nummer 2, Dezember 1991, S. 193–199, PMID 1660837.
- ↑ H. Niwa, K. Yamamura, J. Miyazaki: Efficient selection for high-expression transfectants with a novel eukaryotic vector. In: Gene. Band 108, Nummer 2, Dezember 1991, S. 193–199, PMID 1660837.
- ↑ A. N. Alexopoulou, J. R. Couchman, J. R. Whiteford: The CMV early enhancer/chicken beta actin (CAG) promoter can be used to drive transgene expression during the differentiation of murine embryonic stem cells into vascular progenitors. In: BMC cell biology. Band 9, Januar 2008, S. 2, doi:10.1186/1471-2121-9-2, PMID 18190688, PMC 2254385 (freier Volltext).