SYPRO Orange
SYPRO Orange ist ein Fluoreszenzfarbstoff vom Merocyanin-Typ,[1] der im Zuge einer Proteincharakterisierung zur Proteinfärbung verwendet wird, meistens in einer SDS-PAGE.[3][4]
Eigenschaften
SYPRO Orange bindet wie auch sein Analogon SYPRO Red selektiv an Proteine über 6,5 Kilodalton (auch Glykoproteine) in SDS-Micellen,[1] nicht jedoch an DNA oder Lipopolysaccharide.[5][6] SYPRO Orange ist mutagen, reproduktionstoxisch und möglicherweise karzinogen.[5] Die Absorptionsmaxima liegen bei λ = 300 nm und 470 nm, die Emission ist bei λ = 570 nm maximal.[5] Die Sensitivität bei SDS-PA-Gelen liegt mit SYPRO Orange bei etwa 4–8 ng Protein,[5][7] also etwas schlechter als bei der Silberfärbung. Aufgrund der Fluoreszenz besitzt die SYPRO Orange-Färbung bei einer Mengenabschätzung im Vergleich zur Silberfärbung oder Coomassie einen größeren linearen dynamischen Bereich, d. h. eine bessere Korrelation zwischen der Proteinmenge und der Signalintensität.[5] SYPRO Orange eignet sich nicht zur Färbung von Proteinen auf Western Blots, 2D-Gelen oder IEF-Gelen.[5] Im Gegensatz zur Silber- und Coomassie-Färbung werden zur Fixierung vor einer Färbung zwar auch Essigsäure, aber keine Alkohole wie Methanol oder Ethanol verwendet, da SYPRO Orange zur Färbung auf die Anwesenheit von SDS angewiesen ist.[7]
Einzelnachweise
- ↑ a b c Aleksandr Petrovich Demchenko: Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology III: Applications in Sensing and Imaging Band 3 von Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology. Springer 2011. ISBN 9783642180354. S. 179ff.
- ↑ Europäisches Patent EP0774122A1. PDF.
- ↑ T. H. Steinberg, L. J. Jones, R. P. Haugland, V. L. Singer: SYPRO orange and SYPRO red protein gel stains: one-step fluorescent staining of denaturing gels for detection of nanogram levels of protein. In: Analytical biochemistry. Band 239, Nummer 2, August 1996, S. 223–237, ISSN 0003-2697. doi:10.1006/abio.1996.0319. PMID 8811914.
- ↑ S. Gallagher, D. Chakavarti: Staining proteins in gels. In: Journal of visualized experiments : JoVE. Nummer 17, 2008, S. , ISSN 1940-087X. doi:10.3791/760. PMID 19066521. PMC 3253607 (freier Volltext).
- ↑ a b c d e f Datenblatt SYPRO Orange Protein Gel Stain bei Sigma-Aldrich (PDF).
- ↑ T. H. Steinberg, R. P. Haugland, V. L. Singer: Applications of SYPRO orange and SYPRO red protein gel stains. In: Analytical biochemistry. Band 239, Nummer 2, August 1996, S. 238–245, ISSN 0003-2697. doi:10.1006/abio.1996.0320. PMID 8811917.
- ↑ a b Molecular Probes / Life Technologies: SYPRO Orange and SYPRO Red Protein Gel Stains. 2003. PDF.