„Ellmans Reagenz“ – Versionsunterschied
Ghilt (Diskussion | Beiträge) '''Ellmans Reagenz''' (5,5'-Dithiobis-(2-Nitrobenzoesäure, DTNB) ist ein Stoff, der in der Biochemie zur Bestimmung der Menge an Thiolen in einer Probe verwendet wird. |
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Version vom 29. Juli 2014, 00:25 Uhr
| Strukturformel | ||||||||||
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| Allgemeines | ||||||||||
| Name | Ellmans Reagenz | |||||||||
| Andere Namen |
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| Summenformel | C14H8N2O8S2 | |||||||||
| Externe Identifikatoren/Datenbanken | ||||||||||
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| Eigenschaften | ||||||||||
| Molare Masse | 396,35 g·mol−1 | |||||||||
| Aggregatzustand |
fest | |||||||||
| Schmelzpunkt |
240-245 °C (Zersetzung) | |||||||||
| Sicherheitshinweise | ||||||||||
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| Soweit möglich und gebräuchlich, werden SI-Einheiten verwendet. Wenn nicht anders vermerkt, gelten die angegebenen Daten bei Standardbedingungen. | ||||||||||
Ellmans Reagenz (5,5'-Dithiobis-(2-Nitrobenzoesäure, DTNB) ist ein Stoff, der in der Biochemie zur Bestimmung der Menge an Thiolen in einer Probe verwendet wird.[2]
Eigenschaften
Thiole in Biomolekülen, insbesondere in Cystein-haltigen Proteinen, reagieren mit DTNB unter Freisetzung von 3-Thio-6-Nitrobenzoat (TNB-), welches in neutralen und basischen Lösungen zum gelben Farbstoff TNB2- deprotoniert. Die Menge an freigesetztem TNB2- kann bei einer Wellenlänge von 412 nm photometrisch quantifiziert werden. Die Reaktion erfolgt in stöchiometrischem Verhältnis. Der Extinktionskoeffizienten beträgt in verdünnten Lösungen 14.150 M−1 cm−1[3][4] und 13.700 M−1 cm−1 in höheren Salzkonzentrationen wie 6 M Guanidinhydrochlorid oder 8 M Harnstoff.[4] Für reproduzierbare Ergebnisse kann eine Umkristallisation des DTNB durchgeführt werden.
Alternativ kann 2,4-Dinitrobenzensulfonyl-Fluorescein oder 5-(2-Aminoethyl)dithio-2-Nitrobenzoesäure verwendet werden.[5][6]
Synthese
Ellman stellte DTNB in mehreren Schritten durch Oxidation von 2-Nitro-5-Chlorbenzaldehyd zum Carboxylderivat, durch Erzeugung des Thiols mit Natriumsulfid und durch eine Oxidation der Thiolgruppen zu Disulfidbindungen mit Jod.[2]
Verwendung
Ellmans Reagenz kann zur Bestimmung von Glutathion und Thiolgruppen in Proteinen in gereinigten Lösungen oder in biologischen Proben wie Blut durchgeführt werden.[7][8][9]
Geschichte
DTNB wurde erstmals 1959 von George L. Ellman hergestellt.[2]
Weblinks
Einzelnachweise
- ↑ 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) at Sigma-Aldrich
- ↑ a b c Ellman GL: Tissue sulfhydryl groups. In: Arch. Biochem. Biophys. 82. Jahrgang, Nr. 1, 1959, S. 70–7, doi:10.1016/0003-9861(59)90090-6, PMID 13650640.
- ↑ Collier HB: Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate. In: Anal. Biochem. 56. Jahrgang, Nr. 1, 1973, S. 310–1, doi:10.1016/0003-2697(73)90196-6, PMID 4764694.
- ↑ a b Riddles PW, Blakeley RL, Zerner B: Reassessment of Ellman's reagent. In: Meth. Enzymol. (= Methods in Enzymology). 91. Jahrgang, 1983, S. 49–60, doi:10.1016/S0076-6879(83)91010-8, PMID 6855597.
- ↑ H. Maeda, H. Matsuno, M. Ushida, K. Katayama, K. Saeki, N. Itoh: 2,4-Dinitrobenzenesulfonyl fluoresceins as fluorescent alternatives to Ellman's reagent in thiol-quantification enzyme assays. In: Angewandte Chemie (International ed. in English). Band 44, Nummer 19, Mai 2005, S. 2922–2925, ISSN 1433-7851. doi:10.1002/anie.200500114. PMID 15818626.
- ↑ J. Zhu, I. Dhimitruka, D. Pei: 5-(2-Aminoethyl)dithio-2-nitrobenzoate as a more base-stable alternative to Ellman's reagent. In: Organic letters. Band 6, Nummer 21, Oktober 2004, S. 3809–3812, ISSN 1523-7060. doi:10.1021/ol048404+. PMID 15469355.
- ↑ Sedlak J, Lindsay RH: Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent. In: Anal. Biochem. 25. Jahrgang, Nr. 1, 1968, S. 192–205, doi:10.1016/0003-2697(68)90092-4, PMID 4973948.
- ↑ Riener CK, Kada G, Gruber HJ: Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine. In: Anal Bioanal Chem. 373. Jahrgang, Nr. 4–5, 2002, S. 266–76, doi:10.1007/s00216-002-1347-2, PMID 12110978.
- ↑ R. J. Simpson: Estimation of Free Thiols and Disulfide Bonds Using Ellman's Reagent. In: CSH protocols. Band 2008, 2008, S. pdb.prot4699, PMID 21356901.