SYPRO Ruby
SYPRO Ruby ist ein Fluoreszenzfarbstoff vom Ruthenium-Chelatkomplex-Typ,[1] der zur Färbung von Proteinen im Zuge einer Proteincharakterisierung verwendet wird, meistens in einem Western Blot, in 2D-Gelen oder IEF-Gelen.[2][3][4]
Eigenschaften[Bearbeiten | Quelltext bearbeiten]
SYPRO Ruby bindet selektiv an basische Aminosäuren[1] von Proteinen (auch Glykoproteine) in SDS-Micellen,[1] nicht jedoch an DNA.[2][5] Die Mutagenität, Reproduktionstoxizität und Karzinogenität von SYPRO Ruby ist unbekannt.[2] Die Absorptionsmaxima liegen bei λ = 280 nm und 450 nm, die Emission ist bei λ = 610 nm maximal.[2] Die Sensitivität bei SDS-PA-Gelen liegt mit SYPRO Ruby bei etwa 1 ng Protein,[2] also etwa vergleichbar mit der Silberfärbung.[6] Aufgrund der Fluoreszenz besitzt die SYPRO Ruby-Färbung bei einer Mengenabschätzung im Vergleich zur Silberfärbung oder Coomassie einen größeren linearen dynamischen Bereich, d. h. eine bessere Korrelation zwischen der Proteinmenge und der Signalintensität.[2][7] Die SYPRO Ruby-Färbung besitzt eine vergleichsweise längere Färbezeit von vier Stunden.
Einzelnachweise[Bearbeiten | Quelltext bearbeiten]
- ↑ a b c d Aleksandr Petrovich Demchenko: Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology III: Applications in Sensing and Imaging Band 3 von Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology. Springer 2011. ISBN 9783642180354. S. 181ff.
- ↑ a b c d e f Datenblatt SYPRO Ruby Protein Gel Stain bei Sigma-Aldrich, abgerufen am 28. November 2013 (PDF).
- ↑ K. Berggren, T. H. Steinberg, W. M. Lauber, J. A. Carroll, M. F. Lopez, E. Chernokalskaya, L. Zieske, Z. Diwu, R. P. Haugland, W. F. Patton: A luminescent ruthenium complex for ultrasensitive detection of proteins immobilized on membrane supports. In: Analytical biochemistry. Band 276, Nummer 2, Dezember 1999, S. 129–143, ISSN 0003-2697. doi:10.1006/abio.1999.4364. PMID 10603235.
- ↑ S. Gallagher, D. Chakavarti: Staining proteins in gels. In: Journal of visualized experiments : JoVE. Nummer 17, 2008, S. , ISSN 1940-087X. doi:10.3791/760. PMID 19066521. PMC 3253607 (freier Volltext).
- ↑ T. Rabilloud, J. M. Strub, S. Luche, A. van Dorsselaer, J. Lunardi: A comparison between Sypro Ruby and ruthenium II tris (bathophenanthroline disulfonate) as fluorescent stains for protein detection in gels. In: Proteomics. Band 1, Nummer 5, Mai 2001, S. 699–704, ISSN 1615-9853. doi:10.1002/1615-9861(200104)1:5<699::AID-PROT699>3.0.CO;2-C. PMID 11678039.
- ↑ A. Lamanda, A. Zahn, D. Röder, H. Langen: Improved Ruthenium II tris (bathophenantroline disulfonate) staining and destaining protocol for a better signal-to-background ratio and improved baseline resolution. In: Proteomics. Band 4, Nummer 3, März 2004, S. 599–608, ISSN 1615-9853. doi:10.1002/pmic.200300587. PMID 14997483.
- ↑ M. F. Lopez, K. Berggren, E. Chernokalskaya, A. Lazarev, M. Robinson, W. F. Patton: A comparison of silver stain and SYPRO Ruby Protein Gel Stain with respect to protein detection in two-dimensional gels and identification by peptide mass profiling. In: Electrophoresis. Band 21, Nummer 17, November 2000, S. 3673–3683, ISSN 0173-0835. doi:10.1002/1522-2683(200011)21:17<3673::AID-ELPS3673>3.0.CO;2-M. PMID 11271486.