„RoGFP“ – Versionsunterschied

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== Eigenschaften ==
== Eigenschaften ==
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RoGFP besitzt im Vergleich zur [[Wildtyp]]-Form des GFP zwei [[Cystein]]e in der [[Beta-Barrel|β-Barrel]]-Strukur des GFP an den Positionen 147 und 204 auf zwei benachbarten β-Strängen in der [[zytosol]]ischen Variante des RoGFP1 (Mutationen C48S, S147C).<ref name=Schwarzlander_2008>{{cite journal |author=Schwarzlander M., Fricker, M.D., Muller, C., Marty, L., Brach, T., Novak, J., Sweetlove, L.J., Hell, R., and Meyer, A.J.|title=Confocal imaging of glutathione redox potential in living plant cells |journal=J Microsc |volume=279 |issue=2 |pages=299–316 |year=2008 |pmid= 18778428 |doi=10.1111/j.1365-2818.2008.02030.x}}</ref> Durch [[Oxidation]] der [[Thiole|Thiolgruppen]] der Cysteine wird [[Cystin]] gebildet, was sich in einer Blauverschiebung der Fluoreszenz des RoGFP auswirkt.<ref>C. T. Dooley, T. M. Dore, G. T. Hanson, W. C. Jackson, S. J. Remington, R. Y. Tsien: ''Imaging dynamic redox changes in mammalian cells with green fluorescent protein indicators.'' In: ''The Journal of biological chemistry.'' Band 279, Nummer 21, Mai 2004, S.&nbsp;22284–22293, {{ISSN|0021-9258}}. {{DOI|10.1074/jbc.M312847200}}. PMID 14985369.</ref>


== Anwendungen ==
== Anwendungen ==
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Das RoGFP wird unter anderem als Redox-abhängiger [[Biosensor]] und als [[Reporterprotein]] verwendet. Mit RoGFP kann das [[Redox-Potential]] und die Menge an [[Glutathion]] im Zytosol ''[[in vivo]]'' bestimmt werden,<ref name=Meyer_2007>{{cite journal |author=Meyer, A.J., Brach, T., Marty, L., Kreye, S., Rouhier, N., Jacquot, J.P., and Hell, R.|title= Redox-sensitive GFP in Arabidopsis thaliana is a quantitative biosensor for the redox potential of the cellular glutathione redox buffer. |journal=Plant J|volume=52 |issue=5 |pages=973–86 |year=2007 |doi= 10.1111/j.1365-313X.2007.03280.x|pmid= 17892447}}</ref> indirekt auch [[Wasserstoffperoxid]].<ref>S. G. Rhee, T. S. Chang, W. Jeong, D. Kang: ''Methods for detection and measurement of hydrogen peroxide inside and outside of cells.'' In: ''Molecules and cells.'' Band 29, Nummer 6, Juni 2010, S.&nbsp;539–549, {{ISSN|0219-1032}}. {{DOI|10.1007/s10059-010-0082-3}}. PMID 20526816.</ref> Als [[Fusionsprotein]] des RoGFP mit [[Glutaredoxin]] 1 kann die Fluoreszenz erhöht werden.<ref name=Gutscher_2008>{{cite journal |author=Gutscher, M., Pauleau, A.L., Marty, L., Brach, T., Wabnitz, G.H., Samstag, Y., Meyer, A.J., and Dick, T.P. |title= Real-time imaging of the intracellular glutathione redox potential. |journal=Nat Methods |volume=5 |issue=6 |pages=553–559 |year=2008 |pmid= 18469822 |doi=10.1038/NMETH.1212}}</ref>


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== Weblinks ==
== Weblinks ==

Version vom 22. Juni 2014, 20:10 Uhr

GFP aus Aequorea victoria, Wildtyp-Form.

RoGFP (englisch Redox-sensitive GFP) ist eine veränderte Variante des grün fluoreszierenden Proteins, bei der sich die Fluoreszenz Redox-abhängig ändert.[1][2]

Eigenschaften

RoGFP besitzt im Vergleich zur Wildtyp-Form des GFP zwei Cysteine in der β-Barrel-Strukur des GFP an den Positionen 147 und 204 auf zwei benachbarten β-Strängen in der zytosolischen Variante des RoGFP1 (Mutationen C48S, S147C).[3] Durch Oxidation der Thiolgruppen der Cysteine wird Cystin gebildet, was sich in einer Blauverschiebung der Fluoreszenz des RoGFP auswirkt.[4]

Anwendungen

Das RoGFP wird unter anderem als Redox-abhängiger Biosensor und als Reporterprotein verwendet. Mit RoGFP kann das Redox-Potential und die Menge an Glutathion im Zytosol in vivo bestimmt werden,[5] indirekt auch Wasserstoffperoxid.[6] Als Fusionsprotein des RoGFP mit Glutaredoxin 1 kann die Fluoreszenz erhöht werden.[7]

Im endoplasmatischen Retikulum kann mit RoGFP2 (Mutationen C48S, S147C, S65T) die Bildung von ROS verfolgt werden.[8][9]

Alternative optische Nachweisverfahren verwenden z. B. Resazurin (synonym AlamarBlue) oder die Proteine HyPer oder rxYFP.[10]

Weblinks

  • PDB 2AH8 RoGFP1-R7 in oxidierter Form
  • PDB 2AHA RoGFP1-R8 in reduzierter Form

Einzelnachweise

  1. ↑ Hanson GT, Aggeler R, Oglesbee D, Cannon M, Capaldi RA, Tsien RY, Remington SJ: Investigating mitochondrial redox potential with redox-sensitive green fluorescent protein indicators. In: J Biol Chem. 279. Jahrgang, Nr. 13, 2004, S. 13044–53, doi:10.1074/jbc.M312846200, PMID 14722062.
  2. ↑ K. A. Lukyanov, V. V. Belousov: Genetically encoded fluorescent redox sensors. In: Biochimica et biophysica acta. Band 1840, Nummer 2, Februar 2014, S. 745–756, ISSN 0006-3002. doi:10.1016/j.bbagen.2013.05.030 (freier Volltext). PMID 23726987.
  3. ↑ Schwarzlander M., Fricker, M.D., Muller, C., Marty, L., Brach, T., Novak, J., Sweetlove, L.J., Hell, R., and Meyer, A.J.: Confocal imaging of glutathione redox potential in living plant cells. In: J Microsc. 279. Jahrgang, Nr. 2, 2008, S. 299–316, doi:10.1111/j.1365-2818.2008.02030.x, PMID 18778428.
  4. ↑ C. T. Dooley, T. M. Dore, G. T. Hanson, W. C. Jackson, S. J. Remington, R. Y. Tsien: Imaging dynamic redox changes in mammalian cells with green fluorescent protein indicators. In: The Journal of biological chemistry. Band 279, Nummer 21, Mai 2004, S. 22284–22293, ISSN 0021-9258. doi:10.1074/jbc.M312847200. PMID 14985369.
  5. ↑ Meyer, A.J., Brach, T., Marty, L., Kreye, S., Rouhier, N., Jacquot, J.P., and Hell, R.: Redox-sensitive GFP in Arabidopsis thaliana is a quantitative biosensor for the redox potential of the cellular glutathione redox buffer. In: Plant J. 52. Jahrgang, Nr. 5, 2007, S. 973–86, doi:10.1111/j.1365-313X.2007.03280.x, PMID 17892447.
  6. ↑ S. G. Rhee, T. S. Chang, W. Jeong, D. Kang: Methods for detection and measurement of hydrogen peroxide inside and outside of cells. In: Molecules and cells. Band 29, Nummer 6, Juni 2010, S. 539–549, ISSN 0219-1032. doi:10.1007/s10059-010-0082-3. PMID 20526816.
  7. ↑ Gutscher, M., Pauleau, A.L., Marty, L., Brach, T., Wabnitz, G.H., Samstag, Y., Meyer, A.J., and Dick, T.P.: Real-time imaging of the intracellular glutathione redox potential. In: Nat Methods. 5. Jahrgang, Nr. 6, 2008, S. 553–559, doi:10.1038/NMETH.1212, PMID 18469822.
  8. ↑ Brach T, Soyk S, Müller C, Hinz G, Hell R, Brandizzi F, Meyer AJ: Non-invasive topology analysis of membrane proteins in the secretory pathway. In: Plant J. 57. Jahrgang, Nr. 3, 2009, S. 534–41, doi:10.1111/j.1365-313X.2008.03704.x, PMID 18939964.
  9. ↑ Schwarzländer M, Fricker MD, Sweetlove LJ: Monitoring the in vivo redox state of plant mitochondria: Effect of respiratory inhibitors, abiotic stress and assessment of recovery from oxidative challenge. In: Biochim Biophys Acta. 1787. Jahrgang, Nr. 5, 2009, S. 468–75, doi:10.1016/j.bbabio.2009.01.020, PMID 19366606.
  10. ↑ S. Pouvreau: Genetically encoded reactive oxygen species (ROS) and redox indicators. In: Biotechnology journal. Band 9, Nummer 2, Februar 2014, S. 282–293, ISSN 1860-7314. doi:10.1002/biot.201300199. PMID 24497389.
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